超速离心机用于AAV纯化的优势
无需对不同血清型进行优化
病毒载体已成为前景广阔的基因治疗载体。3因此,非血清型依赖性纯化方案的研究,将成为持续推动病毒载体临床发展的关键之举。4许多AC树脂仅对一种血清型有效,方法开发繁琐。2而密度梯度超速离心法(DGUC)灵活性高,一种方法即可适用于所有血清型。
成本
Yu等人预估,一项小规模临床试验需1016vg/mL AAV病毒基因组。而采用亲和色谱法(AC)产生等量AAV病毒基因组需近10升亲和树脂,费用约50万美元。2相比之下,如果采用DGUC前先对样品进行浓缩,单次运行SW 28转头便可获得1016vg/mL AAV病毒基因组。这种DGUC纯化的商业化成本(COG)约为2000美元。尽管采用SW 28 Ti转头确实有利于提纯AAV,但如果采用贝克曼库尔特的垂直转头和定角转头,比如VTi-50.1,将大幅缩短运行时间并提高实验通量。
工艺质量:得率和纯度
AAV生产的主要难点在于如何获得满足临床研究所需的病毒数量。Yu等人对起始材料进行浓缩后,仅使用2个38.5mL离心管,通过密度梯度超速离心法(DGUC)提纯超3 x 1015 vg AAV。2而采取亲和色谱法(AC),由于AAV亲和介质的结合容量在1012 vg/mL范围内,提纯等量AAV则需要1个3L色谱柱。此外,亲和色谱法(AC)通常无法分辨空壳AAV颗粒,既降低有效得率,又存在重大患者安全风险。5与之相反,密度梯度超速离心法(DGUC)可有效分离空壳和完整包装病毒颗粒。2
小结
密度梯度超速离心法(DGUC)在AAV纯化方面优势显著,如高纯度、高得率、非血清型依赖性和空壳病毒颗粒有效分离等(Yu))。
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